Abstract:
В экспериментах с мутантным штаммом 66А, содержащим рекомбинантный Са-зависимый фоточувствительный белок - экворин, изучены клеточный и Са-ответы на воздействие пермеабилизирующего фунгицида амфотерицина В. Клеточный ответ фиксировали по изменениям роста и развития микромицета (инициация прорастания спор, разрастание мицелия, интенсивность спорообразования). Инкубирование спор (24 ч, 30 °С) в жидкой среде Вогеля, содержащей амфотерицин в конечных концентрациях 2.5, 5.0, 10 мкМ, приводило к 2-3-кратному увеличению количества спор с ростковой трубкой по сравнению с контрольным вариантом (среда без фунгицида). С увеличением концентрации фунгицида до 20 мкМ число спор с проростковой трубкой оставалось на уровне контрольного варианта. Дозозависимый эффект амфотерицина был выявлен у также в процессах разрастания мицелия и спорообразования при культивировании микромицета на плотной среде Вогеля. Изменения содержания внутриклеточного Са в ответ на действие амфотерицина регистрировали методом рекомбинантного экворина по интенсивности люминесценции фотобелка экворина, экспрессированного в микромицет Величина испускаемого света экворина коррелировала с уровнем цитозольного свободного Са. Показано, что сразу после внесения в клеточную взвесь высоких концентраций (10, 20 мкМ) фунгицида, в отличие от контроля и действия малых доз (2.5, 5.0 мкМ) этого антибиотика, в клетках возникают кальциевые вспышки. Повышенный уровень внутриклеточного Са не снижался до исходного на протяжении всего периода исследования и коррелировал с угнетением роста и развития гриба.
